A-769662

A-769662 stimule la AMPK hépatique de rat partiellement purifiée avec un EC50 de 0,8 μM. Ce composé active la AMPK purifiée à partir de plusieurs tissus et espèces de manière dose-dépendante avec des variations modestes des EC50 observés. Les EC50 déterminés pour cette substance chimique à l'aide d'extraits de AMPK partiellement purifiés provenant de cœur de rat, de muscle de rat ou de cellules rénales embryonnaires humaines (HEK) sont respectivement de 2,2 mM, 1,9 mM ou 1,1 mM. Un traitement de 4 heures d'hépatocytes primaires de rat avec ce composé augmente de manière dose-dépendante la phosphorylation de l'ACC, ce qui est corrélé à l'inhibition de la synthèse des acides gras avec un IC50 de 3,2 μM. Il inhibe également la synthèse des acides gras dans les hépatocytes de souris avec un IC50 de 3,6 μM [1] Ce composé active la AMPK à la fois allostériquement et en inhibant la déphosphorylation de la AMPK sur Thr-172, de manière similaire aux effets de l'AMP. [2] Il inhibe la fonction protéasomale par un mécanisme indépendant de l'AMPK. Ce produit chimique affecte l'activité in vitro des protéasomes 26S purifiés mais pas l'activité in vitro des protéasomes 20S purifiés. Il a des effets toxiques sur les cellules MEF. [3] Une recherche récente montre que ce composé inhibe la prolifération cellulaire et la synthèse d'ADN. [4]

Un traitement à court terme de rats Sprague Dawley normaux avec A-769662 diminue les niveaux de malonyl CoA hépatique et le rapport d'échange respiratoire, VCO2/VO2, indiquant une augmentation du taux d'oxydation des acides gras du corps entier. Le traitement de souris ob/ob avec 30 mg/kg b.i.d. de ce composé diminue l'expression hépatique de PEPCK, G6Pase et FAS, abaisse le glucose plasmatique de 40 %, réduit le gain de poids corporel et diminue significativement les niveaux de triglycérides plasmatiques et hépatiques. [1]

• dosage AMPK à 96 puits

  L'activité AMPK est mesurée en surveillant la phosphorylation du substrat peptidique SAMS (20 μM dans les dosages standard et 100 μM dans les dosages d'additivité) suivant un protocole décrit précédemment (Anderson et al., 2004). Pour déterminer si l'activation de l'AMPK induite par A-769662 se produit de manière réversible, l'AMP ou ce composé sont préincubés avec l'AMPK hépatique de rat pendant 10 minutes à 20 fois les concentrations de dosage standard avant la dilution et la mesure de l'activité AMPK.

  [1]

• Lignées cellulaires

  MEF cells

• Concentrations

  300 μM

• Temps dincubation

  24 hours

• Méthode

  Cell viability of MEF cells treated or not with A-769662 is performed as follows: cells are harvested by trypsinization and incubated with 0.5 mg/mL RNase and 50 μg/mL propidium iodine at room temperature in the dark; cell viability is analyzed by flow cytometry using a FACScanto flow cytometer, using an excitation laser at 488 nm and a propidium iodine fluorescence detection at 600 nm. To determine the proportion of cells in each phase of the cell cycle, cells are harvested by trypsinization, collected by centrifugation, washed in PBS and fixed overnight in 80% ethanol at -20 °C. Subsequently, these fixed cells are centrifuged to remove the fixative and incubated for 20 minutes in the dark at room temperature in PBS containing 0.5 mg/mL RNase and 50 μg/mL propidium iodine. Flow cytometry analysis is performed as above. The proportion of cells in G1, S, and G2 is determined using the MODFIT program. Cell culture pictures are taken at the indicated times using a camera coupled to an inverted microscope with a 20 × objective.

• Modèles animaux

  Sprague Dawley rats

• Dosages

  30 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p.